Efecto hormético de la fisetina frente al estrés oxidante en condrocitos sanos de rata

Resumen

Introducción

El estrés oxidante y la senescencia del condrocito participan en la degradación del cartílago y en enfermedades articulares como la osteoartritis, sin que existan tratamientos que detengan su progresión. La fisetina, un flavonoide con propiedades antioxidantes y senolíticas, podría modular la respuesta del condrocito al daño oxidante; sin embargo, su perfil de seguridad y su efecto sobre el fenotipo condrocítico en células sanas han sido poco caracterizados.

Objetivo

Evaluar el efecto antioxidante de la fisetina en condrocitos sanos de rata joven sometidos a estrés oxidante, así como su impacto sobre la viabilidad y el fenotipo condrogénico.

Metodología

Se emplearon condrocitos primarios de rata joven. El fenotipo en cultivo se caracterizó por inmunofluorescencia de agrecano (ACAN), colágeno tipo II (COL2) y LC3-II. La expresión de genes condrogénicos (SOX9, RUNX2, COMP, ACAN, COL2A1, COL1A1, COL10A1) se cuantificó por qPCR con SYBR Green, normalizada al gen de referencia RPL27, a lo largo de tres pases (P0, P1, P2) y tras la estimulación con fisetina (1–80 µM) durante 24 h. La viabilidad se determinó por ensayo de alamarBlue a 24 y 48 h, y los ROS totales por citometría de flujo tras la exposición a tert-butil hidroperóxido (tBHP, 50 µM) con o sin fisetina. La viabilidad y los ROS se analizaron por ANOVA con post hoc de Dunnett; la expresión génica por la prueba de Kruskal-Wallis (mediana y rango intercuartílico); el comportamiento dosis-respuesta de los ROS se modeló con un ajuste no lineal.

Resultados

La inmunofluorescencia confirmó el fenotipo condrocítico (ACAN y COL2 positivos) con presencia de LC3-II, indicativo de actividad autofágica basal. La fisetina no fue citotóxica, a dosis ≤50 µM la viabilidad se mantuvo entre 95–102 % respecto al control a 24 y 48 h, y solo la dosis de 80 µM la redujo significativamente (~88–91 %; p<0.001). Por qPCR, el tBHP redujo la expresión de COL2 y COMP respecto al control (p≤0.022) y la fisetina tendió a restaurar COMP y SOX9 sin alcanzar significancia; a lo largo de los pases solo COL1 aumentó (p=0.011), compatible con desdiferenciación incipiente. El tBHP incrementó los ROS totales 3.5 veces respecto al basal; la fisetina revirtió este efecto de manera hormética e inversamente dependiente de la dosis. Las dosis bajas (1–5 µM) normalizaron los ROS al nivel basal (fold 0.78–0.83; inhibición ~100 %), mientras que la dosis alta (80 µM) los redujo solo parcialmente (fold 1.90). El ajuste dosis-respuesta confirmó este patrón bifásico (R²≈0.88), con efecto máximo en el intervalo de 1–5 µM.

Conclusión

La fisetina ejerce un efecto citoprotector y antioxidante en condrocitos sanos de rata con un perfil hormético, en el que las dosis bajas resultan más eficaces para contener el daño oxidante sin comprometer la viabilidad ni el fenotipo condrocítico. Estos hallazgos preliminares respaldan su potencial como agente condroprotector y sientan las bases para su evaluación en modelos de osteoartritis, con miras a preservar la función articular y prevenir la discapacidad musculoesquelética.