Tissue-resident macrophages regulate the infiltration of inflammatory cells and blastema formation during ear-hole regeneration of early postnatal mice.

Abstract

Introducción. El cierre de una perforación de 2 mm de diámetro realizada en la región proximal de la oreja del ratón en etapa posnatal temprana, representa un modelo accesible para estudiar la regeneración en mamíferos. Se ha demostrado que los macrófagos, células del sistema inmunitario con gran capacidad fagocítica, contribuyen en la regeneración de estructuras compuestas de múltiples tejidos como la aleta caudal del pez cebra, la extremidad del ajolote, la cola del lagarto y la oreja del ratón espinoso. Sin embargo, se desconoce si estas células también participan en la regeneración de la oreja del ratón en etapa posnatal temprana. Objetivo: Evaluar la distribución y la función de los macrófagos durante la regeneración de la oreja del ratón en etapa postnatal temprana. Métodos: Se realizó una perforación de 2 mm de diámetro en la región proximal de las orejas de   27 ratones. Se aislaron ambas orejas de tres ratones al día 1, 2, 3, 5, 7, 14, 21, 28 y 35 posperforación, se fijaron y obtuvieron cortes histológicos. La distribución se evaluó por inmunofluorescencia para la identificación de los siguientes marcadores de macrófagos: CD68, F4/80, CD86 e iNOS, además se realizaron inmunohistoquímicas para la detección de IL10 y Msx2. Para conocer la función de los macrófagos, se organizaron dos grupos de ratones formados por 11 individuos; un grupo control a los que se les inyectó en sus orejas perforadas liposomas control y un grupo experimental a los que se les administró liposomas de clodronato. Las orejas se recolectaron y fijaron a los 3, 10 y 14 días posperforación (dpp). Se obtuvieron cortes histológicos y se procedió con la tinción tricrómica de Masson, inmunohistoquimicas para Msx2 e IL10 e inmunofluorescencias para F4/80, CD68 e iNOS. Resultados: Se observaron células tejido residentes F4/80⁺iNOS⁺ en el tejido sin dañar. Una vez realizado el daño, estas expresaron CD68 y se distribuyeron en la región en regeneración. Durante la inflamación (1-5 dpp), se presenciaron células infiltradas que solo expresaron CD68. No se identificaron células CD86⁺. IL10 se observó durante todo el proceso regenerativo en el área dañada. El tratamiento con liposomas de clodronato retrasó la reepitelización y la regeneración, esta validada por la disminución en la expresión de Msx2, un marcador de células indiferenciadas. Aunque se exhibió una disminución de células F4/80 en el grupo experimental, inesperadamente, se evidenció un aumento de células CD68⁺ y de iNOS⁺F4/80^- en la región dañada a los 3 dpp. Un decremento en los niveles de IL10 se observó en las orejas tratadas con clodronato a los 14 dpp, que coincidió con un retraso en la localización de las células nbbb/80⁺ en la región en regeneración. Conclusiones: Los macrófagos residentes del tejido, que presentan un fenotipo proinflamatorio, son necesarias para inducir la regeneración de la oreja, promoviendo la reepitelización, controlando el infiltrado de células inflamatorias y manteniendo el estado indiferenciado de las células con potencial regenerativo. Adicionalmente, los niveles constantes de IL10 sugieren un control de la inflamación que contribuirían a la regeneración de los tejidos de la oreja.